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方法1:
1.1儀器
采用島津高效液相色譜儀系統,包括:LC-10AT溶劑輸送泵(兩臺)、SPD-10AVVP紫外檢測器、CTO-10AVP柱溫箱、DGU-12A自動脫氣機、SCL-10AVP系統控制器、C-R8A積分儀。
1.2試劑
乙腈、甲醇:色譜純;水:自備超純水;樣品制備用溶劑為分析純;異黃酮標準品Daidzin、Genistin、Daidzein、Genistein購自Sigma公司。
1.3樣品預處理
1.3.1標準品溶液的配制
精確稱取各標準品2.0-4.0mg,置于10ml的燒瓶中,分別加入色譜級甲醇,超聲波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,于40C溫度下保存備用。
1.3.2樣品溶液的制備
精確稱取5mg左右的大豆異黃酮樣品,置于10ml小燒杯中,加入80%的乙醇溶液,超聲波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,轉入HPLC專用小瓶中封口,備測。
1.3.3色譜條件
色譜柱:Lichrosper 100RP-18(4.6mm×25mm;5μm);流動相:含0.1%(V/V)冰醋酸的水溶液(A溶液),含0.1%(V/V)冰醋酸的乙腈溶液(B溶液);時間程序:在35min內B溶液濃度從20%線性遞增至40%;流量:1ml/min;檢測波長:254nm;柱溫:400C;進樣量:5μl;分析時間:35min/樣品。
方法2
2.1儀器
高效液相色譜儀:島津LC-6A型泵,紫外檢測器SPD-6AV,自動進樣器SIL-6A,數據處理裝置C-R3A。
2.2試劑
甲醇:色譜純;水:重蒸水;樣品制備用酒精為分析純;異黃酮標準品Daidzin、Genistin、Daidzein、Genistein購自Sigma公司。
2.3樣品預處理
2.3.1標準品溶液的配制
精確稱取各標準品2.0-4.0mg,置于10ml的燒瓶中,分別加入80%酒精,超聲波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,于40C溫度下保存備用。
2.3.2樣品溶液的制備
精確稱取5mg左右的大豆異黃酮樣品,置于10ml小燒杯中,加入80%的乙醇溶液,超聲波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,轉入HPLC專用小瓶中封口,備測。
2.3.3色譜條件
色譜柱:日本島津公司,Shim-Pack CLC ODS柱(150×6.0mm ID;5μm);流動相為甲醇:醋酸:水=30:3.5:66.5;流速為0-8.5min時1.0ml/min,8.5-47min時1.5ml/min;柱溫:500C;檢測波長:254nm。
注:以上兩種方法僅能測出大豆甙(DAIDZIN)、大豆甙元(DAIDZEIN)、染料木甙(GENISTIN)和染料木素(GENISTEIN)四種成份的含量。
方法3
3.1儀器
高效液相色譜儀:安捷倫HP1100,紫外檢測器,四元泵,手動進樣器。
3.2試劑
甲醇:色譜純;水:重蒸水;樣品制備用酒精為分析純;異黃酮標準品大豆甙(Daidzin)、黃豆甙(Glycitin、染料木甙(Genistin)、大豆甙元(Daidzein)、黃豆甙元(Glycitein)、染料木素(Genistein)購自美國Sigma公司。
3.3樣品預處理
3.3.1標準品溶液的配制
精確稱取各標準品2.0-4.0mg,置于10ml的燒瓶中,分別加入80%酒精,超聲波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,于40C溫度下保存備用。
3.3.2樣品溶液的制備
精確稱取3.0-4.0mg左右的大豆異黃酮樣品,置于10ml小燒杯中,加入80%的乙醇溶液,超聲波助溶,移入10ml容量瓶中并定容至刻度,轉入HPLC專用小瓶中封口,備測。
3.3.3色譜條件
色譜柱:美國安捷倫公司,ZORBAX Eclipe XDB-C18柱(150×6.0mm ID;5μm);流動相:色譜級甲醇(A),含5%(V/V)冰醋酸的水溶液(B),流動相梯度見附表;流速:1.0ml/min;柱溫:200C;檢測波長:254nm。
注:采用此法可以檢測六種大豆異黃酮成份的含量,而且具有分離效果好、操作時間短的特點,但對儀器配置的要求較高。
附表:流動相梯度
時間(min) |
流動相A(%) |
流動相B(%) |
備 注 |
0.00 |
30 |
70 |
|
2.00 |
30 |
70 |
|
7.00 |
40 |
60 |
|
7.01 |
29 |
71 |
|
8.00 |
40 |
60 |
|
14.00 |
60 |
40 |
|
21.00 |
30 |
70 |
|